ABSTRACT
Foram realizadas investigaçöessobre a presença do interferon de membrana amniótica humana (IFN-AM) a fim de permitir pesquisas posteriores a respeito de sua purificaçäo, propriedades químicas e biológicas e ensaios clínicos.Testes de inativaçäo rápida foram realizados para ensejar resultados imediatos.IFN-AM foi preparado pela infecçäo de âmnios pelo vírus da doença de Newcastle.A atividade anti-vírica do IFN-AM foi determinada em um sistema de células Vero-vírus da encefalomiocardite de camundongo ou vírus Sindbis.Para os testes de inativaçäo, preparaçöes de IFN-AM contendo 0;1 e 2 por cento de soro de carneiro foram aquecidas em temperaturas de 35ºC a 100ºC em tempos variáveis e foi medida a atividade antivírica residual.Destes dados, foi calculada a constante de Arrhenius de queda de atividade pelo calor, que foi representada graficamente contra a temperatura absoluta.Os dados de temperaturas altas(45ºC e acima) foram extrapolados para temperaturas baixas(37ºC e abaixo).Os resultados mostraram que o IFN-AM preservou-se melhor em pH 2 em presença de soro.Os dados obtidos nas temperaturas de 45º, 55º e 65ºC permitiram o cálculo de constante de Arrhenius de queda para baixas temperaturas por extrapolaçäo.A -4, 2ºC näo deverá ocorrer perda de ativadade do IFN-AM.
Subject(s)
Humans , Animals , Mice , Sindbis Virus/chemistry , Cell Membrane/immunology , Amnion , Newcastle disease virus/chemistryABSTRACT
A purificaçäo do interferon humano de membranas amnióticas foi realizada para se obter preparaçöes purificadas para sua caracterizaçäo físico-química, estudo de suas atividades biológicas e ensaios terapêuticos. O interferon foi produzido em doença de Newcastle ou o vírus Sendai. A determinaçäo da atividade anti-vírica foi feita em células Vero infectadas com o vírus da encefalomiocardite de camundongo. As preparaçöes de interferon foram concentradas por precipitaçäo por ácido tricloroactivo e cromatografadas em "Blue-Sepharose- concanavalina A, Sepharose ligada ao dipeptídeo triptofnio (trf) - triptofânio ao dipeptídeo triptofânio-tirosina (tyr). Com a "Blue-Sepharose", o pH ótimo de ligaçäo do interferon foi 5,4. A aplicaçäo em batelada mostrou que foram ligadas 37.000 unidades de interferon por ml de gel, sendo portanto, mais eficiente que a aplicaçäo em coluna, na qual somente foram ligadas 17.750 unidades por ml de gel. As fraçöes do pico de atividade foram purificadas 274 vezes, com 12//de recuperaçäo do interferon em um experimento, com um total de 78//de recuperaçäo e um fator de purificaçäo atingido foi de apenas 6,7; os ligantes Sepharose trp-trp e trp-tyr mostraram uma ligaçäo baixa do interferon, menor que 10.000 unidades por ml de gel